دانلود پایان نامه زیست شناسی سلولی و مولکولی

چکیده

استافیلوکوکوس اورئوس از عوامل بیماریزای متداول در انسان و دام است که طیف وسیعی از بیماریها را ایجاد میکند و آنزیم کوآگولاز از عوامل مهم بیماریزای این باکتری می باشد. همچنین بررسی تنوع ژنتیکی ژن کد کننده این آنزیم (coa)  یکی از روش های مولکولی تعیین تیپ جدایه های استافیلوکوکوس اورئوس می باشد. در این مطالعه 30 جدایه بالینی استافیلوکوس اورئوس جدا شده از نمونه های مختلف مثل ادرار، پوست و خون در رشت مورد استفاده قرار گرفت.

 

برای تعیین تیپ کوآگولاز منطقه بسیار متغیر ژن این آنزیم در واکنش PCR تکثیر وسپس مورد هضم آنزیمی با استفاده از آنزیم اندونوکلئاز محدودگر AluI قرار گرفت و تنوع طول قطعات هضم آنزیمی مورد بررسی قرار گرفت. در مجموع در واکنش PCR دو نوع محصول ( به طول های 680 و 750 جفت باز) و شش الگوی مختلف RFLP (280+400, 280+470،340+340  و عدم هضم قطعه 750 جفت بازی) بدست آمد. نتایج بیانگر تنوع ژن کوآگولاز در جدایه های استافیلوکوکوس اورئوس در منطقه می باشد و الگوی PCR-RFLP 280+400 جفت بازی الگوی غالب بوده است.

دانلود پایان نامه زیست شناسی سلولی و مولکولی

 

1-6-2- اسید تیکوئیک

در استافیلوکوک اورئوس، اسید تیکوئیک دیواره باکتری از نوع ریبیتول فسفات می باشد. اسید تیکوئیک ، یک جزء اصلی گیرنده فاژ در استافیلوکوک اورئوس می باشد. علاوه بر این، اسید تیکوئیک نقش مهمی را در نگهداری عملکرد طبیعی فیزیولوژیک بر عهده دارد(118).  اسید تیکوئیک به توسط تنظیم محیط کاتیونی سلول باکتری، فعالیت آنزیم های اتولیتیک(که در رشد دیواره سلولی و جدا شدن سلول های دختری شرکت دارند) را کنترل می کند. موتانت هایی وجود دارند که به طور کامل فاقد اسید تیکوئیک می باشند.

 

در مطالعاتی که بر روی این موتانت ها انجام گرفته نشان داده شده است که پلیمر اسید تیکوئیک برای بقاء ارگانیسم، ضروری نیست اما این موتانت هایی که در برابر فاژ مقاوم هستند نسبت به ارگانیسم های نوع وحشی، رشد آهسته تری دارند و سلول های بزرگ، جدا نشده و دیواره عرضی غیر طبیعی را ایجاد می کنند(10, 101).

1-6-3- پروتئین A

پروتئین A، جزء پروتئینی عمده در دیواره سلولی استافیلوکوک اورئوس می باشد. در حدود 30 درصد از این پروتئین در جریان رشد سلول در درون محیط آزاد می شود (7). این پروتئین یک آنتی ژن میباشد که برای اغلب سوش های استافیلوکوک اورئوس اختصاصی است و در بقیه استافیلوکوک ها و یا میکروکوک ها وجود ندارد.

 

این پروتئین در سلول باکتری با پیوند کووالانسی به ساختمان پپتیدوگلیکان متصل می شود  به طور یکنواخت در تمامی دیواره سلولی توزیع می گردد. خصوصیت منحصر بفرد این پروتئین، توانایی بروز واکنش های غیر اختصاصی با ایمونوگلوبولین هاست(31, 121 , 122).

 

دانلود پایان نامه زیست شناسی سلولی و مولکولی

ارشد زیست شناسی سلولی مولکولی

1–7- فیزیولوژی

1-7-1- صفات کشت

استافیلوکوک، بی هوازی اختیاری است اما در شرایط هوازی رشد بیشتری دارد. بعضی سوش ها به افزایش فشار دی اکسید کربن نیز نیاز دارند. رشد در محدوده درجه حرارت وسیعی از 6.5 درجه سانتی گراد تا 37 درجه می باشد. PH اپتیمم رشد در محدوده 7 تا 7.5 می باشد اما در محدوده 4.2 تا 9.8 نیز رشد می کند.

 

استافیلو کوک ها، نیاز های غذایی پیچیده ای دارند اما به خوبی بر روی اغلب محیط های رایج آزمایشگاهی( از قبیل آگار غذایی و آگار تریپتی کیز سوی) رشد می کنند. برای جدا سازی اولیه آنها( از نمونه های بالینی)، آگار خون گوسفند توصیه می شود. خون انسان حاوی مهار کننده غیر اختصاصی و آنتی بادی است لذا در تهیه آگار خون دار نبایستی مورد استفاده قرار گیرد (7).

در سطح پلیت آگار، کلونی ها اندازهایی در حدود قطر 1 تا 4 میلی متر داشته، صاف، مات، کروی و کمی محدب هستند. در جدا سازی اولیه، اغلب استافیلوکوک اورئوس ها کلونی های زرد طلایی تولید می کنند. رنگ کلونی ها می تواند مربوط به پیگمان های کاروتنوئید باشد که به شدت متغیر بوده و از پرتقالی تیره تا زرد کم رنگ متفاوت است.

 

این تنوع در رنگ کلونی ها معیار با ارزشی برای جدا سازی استافیلوکوک اورئوس از استافیلوکوک اپیدرمیس است. بهترین شرایط برای تولید پیگمان در هنگامی است که ارگانیسم ها برای 24 ساعت در دمای 37 درجه سانتی گراد نگهداری شده و سپس برای 24 تا 28 ساعت دیگر در دمای اتاق باقی بمانند.

 

در شرایط بی هوازی و یا در محیط های مایع، هیچ پیگمانی تولید نمی شود.ارگانیسم هایی که همولیزین محلول را تولید می کنند( در سطح محیط کشت آگار خون دار) منطقه ای از همولیز بتا رادر اطراف کلونی های خود به وجود می آورند(7 , 8 , 129).

 

 

دانلود پایان نامه زیست شناسی سلولی و مولکولی

 

 

1-7-2- متابولیسم

انرژی در مسیر های تنفسی و تخمیری هر دو به دست می آید. در شرایط مناسب رشد، هر یک از مسیر های گلیکولیز، ار قبیل مسیر پنتوز فسفات و چرخه اسید سیتریک فعال هستند. استافیلوکوک در شرایط پتانسیل اکسیداسیون – احیاء بالا و پایین هر دو، توانایی رشد دارد که مزیت مناسبی برای ارگانیسم می باشد تا اینکه بتواند در مسکن های طبیعی در سطوح مخاطی و در رقابت با بقیه گونه های باکتریال فلور مخلوط میکروبی( در محل عفونت) به رقابت بپردازد ( 34 , 112, 133).

سلول هایی که در شرایط هوازی رشد می کنند آنزیم کاتالاز را تولید می نمایند. در کشت آگار خون دار که در آنها تست کاتالاز انجام می شود بایستی از انتقال گلبول های قرمز(در همراهی با ارگانیسم)اجتناب شود، کاتالاز در سلول های گلبول های قرمز وجود دارد بنابراین، حضور آن در مخلوط باکتری ممکن است عامل بروز واکنش مثبت کاذب شود ( 7 , 8 ).

1-7-3- شناسایی

توانایی تولید آنزیم کواگولاز( آنزیم لخته کننده پلاسما) مناسب ترین و قابل قبول ترین ویژگی در مقاصد تشخیصی است. تقریباً 97 درصد از استافیلوکوک هایی که از نمونه های پاتولوژیک به دست می آیند این آنزیم را آزاد می کنند. در آزمون بررسی تولید کواگولاز، بایستی از تست لوله ای استفاده شود. تست اسلایدی در مقاصد غربالی مفید است و ممولاً نتایج آن به خوبی با تست لوله ای مطابقت دارد. در تست اسلایدی، حضور یک فاکتور توده ای کننده در سطح باکتری ارزیابی می شود که از آنزیم کواگولاز آزاد متمایز می باشد. ارزشمندی تست اسلایدی نسبت به روش لوله ای کمتر است (7).

 

دانلود پایان نامه زیست شناسی سلولی و مولکولی

ارشد زیست شناسی سلولی مولکولی

منبع : بیست میشم

IRT 5,000 – خرید نهایی کردن خرید مورد به سبد خرید اضافه شد